背景介绍
细胞凋亡是一种重要的细胞程序性死亡过程,对于维持组织的稳态、免疫应答和生物发育至关重要。在许多疾病如癌症、神经退行性疾病和免疫性疾病中,细胞凋亡异常与病理过程密切相关。因此,准确、敏感地检测和量化细胞凋亡对于疾病机制的研究、药物筛选和治疗评估具有重要意义。
主要检测方法及其适用场景
TUNEL染色法:利用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP-biotin标记,标记凋亡细胞的DNA末端,然后用荧光或酶标记的亲和试剂检测标记的DNA。该方法能够准确测量细胞中的DNA断裂,定量分析凋亡细胞比例。其优点在于高度特异性,可以定量测定凋亡细胞比例。
Annexin V/PI双染法:利用Annexin V与荧光标记的染料(如FITC)结合凋亡细胞的表面磷脂酰丝氨酸(PS)翻转,同时用PI染色标记细胞的细胞膜完整性。该方法能够区分凋亡细胞(Annexin V阳性、PI阴性或阳性)和坏死细胞(Annexin V阴性、PI阳性)。优点在于能够提供凋亡细胞和坏死细胞的区分和定量分析。
Caspase活性检测:利用荧光基团标记的底物或底物类似物,检测细胞中半胱氨酸蛋白酶(caspase)活性的增加。该方法能够直接反映细胞内凋亡信号通路的激活。其优点在于高度特异性。
案例展示
题目:The neuroprotective efect of mesenchymal stem cells is mediated through inhibition of apoptosis in hypoxic ischemic injury
期刊:World Journal of Pediatrics 发表时间:2020 影响因子:9.1